Диссертационная работа:
Кухаркина Ольга Венедиктовна. Получение и изучение свойств
препаратов фактора переноса против некоторых вирусных и бактериальных инфекций
животных : Дис. ... канд. биол. наук : 03.00.06 : Владимир, 2003 140 c. РГБ ОД,
61:04-3/409
Актуальность темы. Общеизвестно, что при многих
заболеваниях, вызванных вирусными, бактериальными и другими инфекционными
агентами, преимущественно главным фактором защиты организма является
специфический гуморальный иммунный ответ [1,2]. Но при всей важности
гуморальной формы реагирования отмечают, что, в первую очередь, гуморальные
реакции имеют под собой клеточную основу
[3].
Клеточно-опосредованной формой реагирования называют
такие формы иммунных реакций, в которых эффекторными клетками являются лимфоциты,
имеющие специфические рецепторы к тем или иным антигенам.
Клеточно-опосредованный иммунитет (КОИ) передается клетками костного мозга,
селезенки, лимфатических узлов и крови [9].
За клеточно-опосредованный иммунитет ответственны
сформированные в тимусе Т-лимфоциты, которые встречаются особенно в
тимусзависимых зонах лимфоидных органов, в лимфе (около 80 % всех лимфатических
клеток, в выходящей из лимфатических узлов лимфе), а так же крови [5].
При воздействии антигена в иммунокомпетентных
Т-клетках начинаются процессы деления и дифференцирования, в результате которых
образуется популяция специфически сенсибилизированных лимфоцитов.
Сенсибилизированные лимфоциты содержат фактор,
способный
переносить опосредованный клетками иммунитет на
несенсибилизированные лимфоциты. Эта способность
была открыта в
1949 году, а фактор, отвечающий за перенос клеточно-опосредованного
иммунитета, был назван фактором переноса (ФП). Это низкомолекулярная
антигенспецифическая гетерогенная смесь пептидов и рибонуклеопептидов, способная
специфически переносить ГЗТ к определенным антигенам [6].
Необходимость изучения передачи клеточного
иммунитета с помощью фактора переноса обусловлена тем, что эта проблема
недостаточно раскрыта. Многие исследователи предполагают, что трансфер фактор
(TF) сможет обеспечить защиту организма от заболеваний, вызванных различными
инфекционными агентами [15, 27, 43, 62, 69, 95, 107, 118, 122, 129, 136, 144,
162, 173, 182, 205].
Так как для препаратов фактора переноса
не существует видового барьера, он может быть универсальным для любого вида
животного и человека. Препараты, приготовленные из лимфоцитов крови и лимфоидных органов не иммуногенны, не токсичны, поэтому их
применение безопасно. Иммунитет развивается по типу
гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и сохраняется от нескольких
месяцев до года [2, 25]. Все представленные данные говорят о необходимости
изучения передачи клеточно-опосредованного иммунитета с помощью лимфоцитов,
полученных от сенсибилизированных организмов.
Для испытания фактора переноса применяют тесты по
оценке клеточного иммунитета [20].
В изучении клеточного иммунитета большую роль вносит
познание возможности передачи состояния сенсибилизированности от одного
организма другому с помощью иммунных лимфоцитов [4]. Реакция организма на
введение иммунных лимфоцитов развивается по типу замедленной
гиперчувствительности. Это может быть определено соответствующими кожными
тестами. Развитие реакции ГЗТ хорошо коррелируетря с реакцией ингибиции
миграции лейкоцитов in vitro. Реакция ингибиции миграции лейкоцитов (ИМЛ)
является наиболее точным тестом для оценки клеточно-опосредованного иммунного
ответа.
Заболевания молодняка крупного рогатого скота (КРС)
наносят большой экономический ущерб, несмотря на наличие средств специфической
и неспецифической профилактики, поэтому необходим новый подход к решению этой
проблемы. Использование препаратов ФП в
ветеринарной практике является новым направлением
иммунологической науки, и ряд вопросов по этой теме остается не решенным.
Диссертация имеет характер поискового
экспериментального исследования, которое является фрагментом научной темы по
изучению клеточных медиаторов и новых средств специфической профилактики.
Цели и задачи исследования. Основной целью работы было
экспериментальное изучение возможности использования препаратов ФП для
профилактики некоторых инфекционных болезней молодняка КРС.
Для достижения поставленной цели было необходимо
решить следующие задачи:
оптимизировать методику получения
лимфоцитарной массы из лимфоидных органов, молозива и периферической крови
животных;
получить иммунопотенцирующий препарат
фактора переноса на основе диализата экстракта лейкоцитов (ДЭЛ) крови,
лимфатических узлов, селезенки, молозива;
протестировать иммунологическую активность ДЭЛ
против некоторых бактериальных и вирусных инфекций;
изучить особенности иммунитета, возникающего в ответ
на введение препаратов фактора переноса на основе ДЭЛ;
определить взаимодействие клеточного и гуморального
иммунитета при различных способах активации иммунокомпетентных клеток;
- разработать научно-методическую документацию для
оценки
клеточно-опосредованного иммунитета (КОИ) животных.
Научная новизна работы. Научная новизна проведенных
экспериментальных исследований состоит в том, что:
- разработана схема сенсибилизации животных доноров
ДЭЛ;
- получены препараты ФП на основе ДЭЛ к вирусным и
бактериальным антигенам;
разработана методика получения препаратов
TF из периферической крови, лимфоидных органов, молозива;
определена возможность перенесения КОИ ксеногенным
животным с помощью ДЭЛ;
определены сроки возникновения клеточного и
гуморального иммунитета у животных при иммунизации и гипериммунизации вирусными
антигенами;
отмечено равноценное влияние клеточного и
гуморального иммунитета при защите организма животных от кишечных инвазий;
Практическая ценность результатов исследования.
Экспериментальные
материалы вошли в нормативно техническую
документацию по получению и тестированию препаратов ФП на основе
ДЭЛ, одобренную ученым советом и утвержденную директором
института.
регламент по получению препаратов ДЭЛ из лимфоцитов
селезенки, лимфатических узлов и лейкоцитов периферической крови и молозива;
методические рекомендации по тестированию
иммунологической активности TF in vitro в реакции замедления миграции
лейкоцитов под слоем агарозы;
методические рекомендации по тестированию активности
иммуностимулятора in vivo в реакции гиперчувствительности замедленного типа.
Публикация научных исследований. По теме диссертации опубликовано 7
научных работ.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены и
опубликованы в материалах научных конференций: «Достижения молодых ученых в
ветеринарную практику» (г. Владимир, ВНИИЖЗ, 2000 г.); «Современные проблемы
селекции, ветеринарной генетики и защиты животных» (г. Витебск, Республика
Беларусь, 2001 г.); «Мониторинг распространения и предотвращения особо опасных
болезней животных»
(г. Самарканд, Республика Узбекистан, 2001 г.);
«Вет. медицина: Міжвід. тем. наук., зб. 80 рок. ІЕКВМ» (г. Харьков, Республика
Украина 2002 г.); «Актуальные проблемы свиней крупного и мелкого рогатого
скота» (г. Владимир, 2002 г.), «Современные вопросы патологии
сельскохозяйственных животных» (г. Минск, Республика Беларусь, 2003 г.),
«Актуальные проблемы инфекционной патологии животных» (г. Владимир, 2003 г.).
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 140
страницах и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, результаты
собственных исследований, выводы, практические предложения, приложения. Список
литературы включает 209 источников, в том числе 27 работ на русском языке.
Работа иллюстрирована 10 рисунками и 24 таблицами.
Основные положения, выносимые на защиту
- оптимизация методики получения лимфоцитарной массы
из
лимфоидных органов, молозива и периферической крови
животных;
способ получения препаратов ФП на основе ДЭЛ, из
периферической крови, лимфоидных органов и молозива лабораторных и естественно
восприимчивых животных;
результаты по тестированию иммунологической
активности ФП в реакциях ингибиции миграции лейкоцитов под слоем агарозы и в
реакции гиперчувствительности замедленного типа;
особенности иммунитета, возникающего в ответ на
введение препаратов ФП на основе ДЭЛ;
- результаты, полученные при совместной активации
клеточного и
гуморального иммунитета при помощи TF и вакцин на
лабораторных и естественно восприимчивых животных;
Исследования
по диссертационной работе выполнены в 1999-2003 гг. в ФГУ
Форум 
Календарь